الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 221 |  |  |
| | | from | 221 | | |
Abstract
الفيروسات الغدية هي فيروسات شائعة تسبب مجموعة متنوعة من الأمراض وقد يصاب الشخص بعدوى الفيروس الغدي في أي عمر، ويعد الأشخاص الذين يعانون من خلل في جهاز المناعة، و اللذين يعانون من امراض مزمنة و الاطفال تحت عمر خمس سنوات هم الأكثر عرضة من غيرهم للإصابة بعدوى الفيروس الغدي الحادة. وتختلف العدوى بالفيروس الغدي باختلاف الأنماط الجينية. من بين هذه الأنماط الجينية ، الانماط ( A – G - F ) وهم الاكثر شيوعاً.هدفت الدراسة الحالية بالكشف المصلي والجزيئي عن الفيروس الغدي ، وتحديد النمط الجيني الاكثر انتشاراً بين المرضى المصابين ، وتحديد دور الفيروس الغدي البشري كأحد الأسباب المسببة لالتهاب ملتحمة العين والجهاز التنفسي و التهاب الأمعاء الفيروسي. في الدراسة الحالية ،تم تجميع 120 عينة (90 عينة براز و 15 عينة التهاب الجهاز التنفسي و 15 عينة التهاب الملتحمة) لأفراد بأعمار مختلفة تم جمعها من الفترة من نوفمبر 2021 إلى نوفمبر 2022. لوحظ معدل الذروة خلال أشهر أكتوبر2022 (22/120) بمعدل 18.3٪ ، سبتمبر2022 (20/120) بمعدل 16.6٪ ، أغسطس 2022(15 / 120) بمعدل 12.5٪ .
الاعراض السريرية:
كانت الأعراض السريرية الأكثر شيوعًا للمرضى المصابين بالفيروس الغدي هي الإسهال بنسبة (100٪) والحمى بنسبة (67.7٪) وآلام البطن بنسبة (53.3٪) والقيء بنسبة (40٪) .
ديموغرافيا:
فيما يتعلق بالجنس : كان هناك تباين في عدد عينات الذكور و الاناث فكانت نسبة الذكور اعلى من نسبة الاناث في العينات المشتبة باصابتها بالفيروس الغدي , في القليوبية بلغ عدد عينات الذكور 28 عينة بنسبة 70٪ والاناث 12 عينة بنسبة 30٪. وفي الإسكندرية بلغ عدد الذكور 17 عينة بنسبة 42.5٪ ، وفي الإناث 23 عينة بنسبة 57.5٪. وفي محافظة القاهرة كان عدد الذكور 24 عينة بنسبة 60٪ ، والإناث 16 عينة بنسبة 40٪ ، وبذلك بلغ المجموع الكلي لعينات الذكور 69 عينة بنسبة 57.5% و 51 عينة للاناث بنسبة 42.5% . كذلك في العينات التي اعطت نتيجة موجبة في اختبار ( ILFST) كانت نسبة الذكور اعلى من نسبة الاناث حيث بلغ عدد العينات الموجبة للذكور (13/20 ) بنسبة 65% و( 7 /20 )عينات موجبة للاناث بنسبة 35%.
فيما يتعلق بالعمر:
في العينات المشتبه اصابتها بالفيروس الغدي قسمت الاعمار الى اربع فئات عمرية اقل من 12 شهر و من 12-24 شهر و من 24 شهر الى 60 شهر من 35-45 سنة . في مجموعة (أقل من 12 شهرًا) كان العدد الإجمالي للعينات 22 عينة. في مجموعة (12-24 شهرًا) كان عدد العينات 42 عينة. في مجموعة (24-60 شهرًا) كان عدد العينات 26عينة. في مجموعة (35-45 سنة) كان عدد العينات 30 عينة. كان هناك تباين في نسبة الصابة كانت نسبة الاصابة في الفئة العمرية 12-24 شهر هي النسبة الاعلى من بين الفئات الاربعة . بالنسبة للعينات الإيجابية حسب اختبار ILFST كانت الأعمار متباينة وتم تصنيفها إلى ثلاث فئات. في مجموعة (أقل من 12 شهرًا) كان العدد الإجمالي للعينات 4 عينات. في مجموعة (12-24 شهرًا) كان عدد العينات 10 عينات. في مجموعة (24-60 شهرًا) كان عدد العينات 6. كانت نسبة الاصابة في الفئة العمرية 12-24 شهر أيضاً هي النسبة الاعلى بين الفئات.
المحافظات :
فيما يتعلق بعدد العينات الموجبة حسب اختبار ILFST والتي تم جمعها من المصابين بفيروس HAdVفقد كانت نسبة الاصابة من حيث الاعلى على التوالي محافظة القليوبية بنسبة 30٪. ثم محافظة القاهرة كانت نسبة الاصابة 20٪.ثم محافظة الاسكندرية كانت نسبة الاصابة 16.6٪ حيث تباينت نسب الاصابات بين المحافظات الثلاث من حيث نسبة عدد المصابين .حيث كانت محافظة القليوبية هي الأكثر من حيث نسبة الإصابة .
فيما يتعلق بتباين فصائل الدم :
في إجمالي عينات المرضى المشتبه بهم . من مجموع ١٢٠ مشتبه باصابته بالفيروس الغدي . كانت مجموعة الدم A مكونة من ٥٢عينة (٣١ ذكور ،٢١ اناث) وفصيلة الدم B مكونه من ٣٠عينة(١٦ذكور ،١٤ اناث) ، فصيلة الدم O 12عينة مكونه من (٧ ذكور، ٥ اناث) وفصيلة الدم AB مكونه من 26 عينة (١٥ ذكور،١١ أناث ) مشتبه باصابته بالفيروس الغدي.حيث كانت فصيلة الدم A هي الاعلى بنسبة 43.33% وكانت فصيلة الدم O هي الاقل بنسبة10%. أما في يخص تباين فصائل الدم بين العينات حسب اختبار ILFST. من مجموع ٢٠ مشتبه باصابته بالفيروس الغدي. كانت مجموعة الدم A مكونة من 10عينات (٧ ذكور ،٣ اناث) وفصيلة الدم B مكونه من 4 عينات (٣ ذكور ،١ اناث) ، فصيلة الدم O 2عينة مكونه من (١ ذكور، ١ اناث) وفصيلة الدم AB مكونه من 4عينات (2 ذكور،2 أناث )مشتبه باصابته بالفيروس الغدي.حيث كانت فصيلة الدم A هي الاعلى بنسبة 8.33% وكانت فصيلة الدم O هي الاقل بنسبة 1.67%.
طرق الكشف :
تم استخدام طرق مختلفة للكشف عن الفيروسات الغدية مثل اختبار ILFST ، وزراعة الخلايا ، وتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل و تحديد البروتينات و الاحماض الأمينية للعزلات الفيروسية .
الكشف المصلي :
اجرينا أولاً اختبار ILFST للعينات الكلية , تم الكشف عن 20عينة موجبة من مجموع 120 عينة لمرضى ظهرت عليهم علامات الإصابة بالفيروس الغدي ، ولم تظهر نتيجة ايجابية بالنسبة لعينات الملتحمة والجهاز التنفسي .
الكشف البيولوجي:
زراعة الفيروس الغدي : تم إجراء زراعة لعينات الدراسة الموجبة استنادا لاختبار ILFST على Vero Cell و في وسط مثالي لنمو الفيروس ، ستة عينات موجبة من البراز لالتهاب المعدة والأمعاء (الكود 7،8،9،10،11 و 12) ، ثلاث عينات لكل من التهاب الملتحمة (الكود 1،2 و 3) وعدوى الجهاز التنفسي (الرمز 4 ، 5 و 6) ، وتم إكثارها على Vero Cell في وسط بيئي مثالي لمدة 7 ايام ، وتمت متابعة العينات يومياً. أظهرت النتائج أن 6 عينات من الجهاز الهضمي (7،8 ، 9،10،11 و 12) أظهرت تأثيرات سيتوباثولوجية (CPE) بينما 6 عينات لكل من التهاب الملتحمة ثلاث عينات (الكود 1،2 و 3) ، ثلاث عينات من الجهاز التنفسي (الكود 4 ، 5 , 6) لم تظهر أي تأثيرات سيتوباثولوجية (CPE) . تمت متابعة نتائج الاعتلال الخلوي في اليوم الأول والثاني والثالث ، ظهرت النتائج بعد 24 ساعة ظهر تأثير سيتوباثولوجي إيجابي على 3 عينات (الكود 8 و 11 و 12). بعد 48 ساعة ظهر تأثير تأثير سيتوباثولوجي إيجابي على عينتين (كود 7 ، 9) . بعد 72 ساعة ظهر تأثير سيتوباثولوجي إيجابي على عينة واحدة (كود 6).
تأثيرات السيتوباثولجيا على cell : Vero
كان CPE عبارة عن درجات متغيرة من CPE حيث تتكتل جزئيًا وتتقلص الخلايا وتظهر أيضًا كخلايا كروية وعملاقة ، لكن الخلايا غير المصابة لم تظهر تأثيرات سيروباثولجية
الكشف الجزيئي :
تم إجراء تعريف للفيروس المعزول على cell Vero بواسطة تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد MultiplexPCR للكشف عن الفيروس و وتأكيد وجوده في (4) عينات (كود 12,11,10,9) التي أظهرت نتائج إيجابية في مزرعة الخلايا و ايضا ً للكشف النمط الجيني للفيروس الغدي. تم تأكيد الإصابة الإيجابية في (4) عينات باستخدام تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد MultiplexPCR . وتم الكشف عن النمط الجيني للعينات الاربعة ، وتبين أنها تنتمي إلى النمط الجيني ( (F-40المسبب لالتهاب المعدة والأمعاء للإنسان .
تحليل التسلسل الجيني للعينات :
تم تحليل التسلسل الجيني للعزلات الفيروس الغدي الاربعة ولوحظ التباين والاختلاف في تتابع النيوكليوتيدات وكذلك نسب القواعد التي تنتمي جميعها إلى النمط الجيني F-40. تم حساب نسبة التباين والتقارب الوراثي والتكرار بين القواعد النيتروجينية فيما يتعلق بعدد القواعد النيتروجينية Cytosine C و Guanine G و Adenine A و Thymine T لكل عينة بالنسبة إلى العدد الإجمالي للقواعد النيتروجينية للعينة ، وكذلك تم حساب تباين كل قاعدة نيتروجينية فيما يتعلق بإجمالي عدد القواعد النيتروجينية للعزلات الأربعة ، وكذلك حساب نسبة الجوانين إلى السيتوزين ونسبة الأدينين إلى الثايمين. النسبة بين الجوانين والسيتوزين والأدينين و الثايمين على المستوى الجيني في العزلات الاربعة من النمط الجيني F-40 حيث كانت نسبة القواعد النتروجينية الجوانين الى نسبة القواعد النتروجينية سايتوسين في العزلة الاولى هي 76.40 . في العزلة الثانية كانت نسبة القواعد النتروجينية جوانين الى نسبة القواعد النتروجينية سايتوسين هي 73.62. في العزلة الثالثة كانت نسبة القواعد النتروجينية الجوانين الى نسبة القواعد النتروجينية السايتوسين هي 74.41. في العزلة الرابعة كانت نسبة القواعد النتروجينية جوانين الى نسبة القواعد النتروجينية سايتوسين 76.44 .اما كانت نسبة القواعد النتروجينية الادنين الى نسبة القواعد النتروجينية الثايمين في العزلة الاولى 1.03 . و في العينة الثانية كانت نسبة القواعد النتروجينية الادنين الى نسبة القواعد النتروجينية الثايمين 1.08. في العزلة الثالثة كانت نسبة القواعد النتروجينية الادنين الى نسبة القواعد النتروجينية الثايمين 1.08 .في العزلة الرابعة كانت نسبة القواعد النتروجينية الادنين الى نسبة القواعد النتروجينية الثايمين 1.08 .كما وجد ان نسبة مجموع القواعد النتروجينية الجوانين الى القواعد النتروجينة السايتوسين في العزلات الاربعة ذات تباينات بين القواعد النتروجينة جوانين 25.75% والقواعد النتروجينية سايتوسين 34.20% بنسبة 1.03 وبين القواعد النتروجينة الادنين 19.33% وبين الثايمين والادنين 20.69%.
يرجع أهمية تحليل التتابع الينوكليوتيدي لعزلات الفيروس الغدي الى معرفة التسلسل الجيني للفيروس الغدي وملاحظة مدى التباين والتشابه داخل النمط الجيني الواحد مما يساهم في معرفة الآلية التي يصيب بها الفيروس داخل النمط الجيني الواحد.
تحليل تسلسل الأحماض الأمينية :
فيما يتعلق بتحليل تسلسل الأحماض الأمينية في العزلات الاربعة الموجبة (كود 12,11,10,9) للكشف عن مواقع المحاذاة والتباين للأحماض الأمينية بين عزلات HAdV الإيجابية تم تحليل الأحماض الأمينية المحددة وفقًا لتحليل تسلسل الأحماض الأمينية عبر موقع الويب: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/. أظهر تحليل تسلسل الأحماض الأمينية 18 نوعًا من الأحماض الأمينية التي تتكون منها عزلات الفيروس الغدي الأربعة. من بين الأحماض الأمينية الأكثر شيوعًا في العزلات الإيجابية الأربع كان Threonine 41 amino acid ، يليه R. Arginine 37 amino acid ، ثم Valine و D.Aspartic 32 amino acid. أظهر تحليل تسلسل الأحماض الأمينية أيضًا 342 حمضًا أمينيًا تتكون منها عزلات الفيروس الغدي الأربعة. يتألف من 87 حمض أميني (HAdV- 9) ، و 87 حمض أميني (HAdV- 10) ، و 84 من الأحماض الأمينية (HAdV- 11) ، و 84 من الأحماض الأمينية (HAdV- 12). أيضا ، كان هناك تباين في بعض مواقع الأحماض الأمينية بين العزلات. حيث كان هناك تباين في الحمض الأميني R. أرجينين عند التسلسل 32 لعزلة ((HAdV-9 مقارنة بالحمض الأميني Threonine عند التسلسل 32 من عزلات HAdV 10) و HAdV 11و (HAdV 12. أيضًا ، التباين في الحمض الأميني F عزلة( HAdV – 9) مقارنة بالحمض الأميني Y Tyrosine عند التسلسل 45 من العزلات (HAdV-10, HAdV 11 , HAdV 12).
تقدير المحتوى البروتيني في عزلات HAdV:
باستخدام مقياس الطيف الضوئي ، تم تقدير البروتين الفيروسي لأربع عزلات HAdV (كود 12,11,10,9) على طول موجي 595 نانومتر ، وكانت (0.65, 0.60 0.64 و 0.62 ملجم / مل) على التوالي. كان هناك اختلاف في كمية محتوى البروتين في عزلات الفيروس الغدي الأربعة.
وفيما يتعلق بنمط البروتين لعزلات HAdV:
تم تحديد تباين البروتينات الهيكلية والوظيفية لأربع عزلات من HAdV (كود 12.11,10,9) باستخدام SDS-PAGE. أظهرت تسعة أنماط بروتينية لأربع عزلات من HAdV ، و اختلفت هذه الأنماط التسعة في الوزن الجزيئي والكثافة. كما تم تحديد Polymorphism بين أربعة عزلات من HAdV 45.45٪ Polymorphic (95 ، 75 ، 70 ، 65 و 40 KD) بالنسبة للبروتين المعلم protein marker (M)) وهذا يوضح التباين المعنوي بين العزلات فيما يتعلق بالنمط البروتيني . بينما 54.54٪ Monomorphic (110 ؛ 85 ؛ 50 ؛ 25 ؛ 20 و 10 KD ) .
تحديد ملف البروتينات Vero cell المصابة:
تم تحديد تأثير أربع عزلات HAdV على التعبير الجيني لخلايا فيرو بواسطة SDS-PAGE. وتم الكشف عن اختلافات واضحة في البروتين المعبر عنه لخلايا Vero المصابة بأربعة عزلات من HAdV مقارنة بخلايا Vero الطبيعية كعنصر تحكم . ايضاً تم تقدير SDS-PAGE الوزن الجزيئي (kDa) وعدد النطاقات. تم اكتشاف ما مجموعه 12 عديد ببتيد ، تتراوح من 5 إلى 100 كيلو دالتون. 4 منها كانت متعددة الأشكال (33.33٪) ، بينما كانت 8 أحادية الشكل (66.67٪) ، وسجل عدد البروتينات (9 نطاقات) في خلية Vero الطبيعية (C) و 10 نطاقات لـ HAdV -9 و HAdV -10 المصابة بالفيروسات و 11 نطاقًا لـ AdV-11 و AdV-12 من ناحية أخرى ، تم تسجيل بروتينات الاختفاء (75 و 58 و 20) في خلايا Vero الطبيعية ؛ وسجل (75 و 63) في خلايا فيرو HAdV -9 و HAdV -10 المصابة ؛ (58) سجل في خلايا فيرو AdV-11 المصابة .