الفهرس 
List of contentsOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 107 |  |  |
| | | from | 107 | | |
Abstract
لقد أثير موضوع الأمن الغذائي ودوره التغذوي عدة مرات نتيجة زيادة تفشي حالات التسمم الغذائي وسلسلة من الاضطرابات الصحية التي أدت إلى وفيات إنسانية ، في المقام الأول في البلدان النامية ، وحيث أن الغذاء هو المطلب الانسانى الأساسى للحياة. لذلك لابد من تطوير وتحسين فى قطاع سلامة الغذاء.
بروتينات شرش اللبن هي منتجات ثانوية لإنتاج الجبن تُستخدم في مجموعة متنوعة من التطبيقات الغذائية نظرًا لقيمتها الغذائية وأنشطتها الوظيفية وتكلفتها المنخفضة.
لقد وجد أن للتحلل المائي الأنزيمي المزيد من الفوائد الوظيفية والتغذوية لذلك تم تحلل بروتين شرش اللبن للبقر والأغنام والماعز المنقى بواسطة إنزيمات مختلفة من أصل حيواني (البيبسين والتريبسين) والأصل الميكروبي (ألكالاز ، سافيناز ، ونيوتراز) من أجل تحديد الأنشطة المضادة للبكتيريا ومضادات الأكسدة لبروتين شرش اللبن المائي ، أيضًا كأجزاء SEC ، في الدراسة الحالية. وجد أن بروتين شرش الحليب للأغنام والماعز غير المتحلل له نشاط مضاد للبكتيريا ضد كل من الإشريكية القولونية والمكورات العنقودية الذهبية.
بالنسبة لبروتين شرش اللبن البقري ، وجد أن لمحللات الالكالاز ومحللات السافيناز نشاطًا مضادًا للبكتيريا أعلى ، خاصةً ضد بكتيريا المكورات العنقودية الذهبية. وقد وجد أيضا ان تحلل البيبسين لبروتين شرش اللبن للأغنام نشاطا مضاد للبكتيريا أعلى ضد الإشريكية القولونية والمكورات العنقودية الذهبية من محللات الكالاز.
كان التحلل المائي البيبسين من بروتين شرش اللبن للماعز أعلى نشاطا مضاد للبكتيريا (الإشريكية القولونية والمكورات العنقودية الذهبية) عند مقارنته ببروتينات شرش اللبن للبقر والأغنام ، مما يثبط تمامًا كلاً من الإشريكية القولونية والمكورات العنقودية الذهبية. ونتيجة لذلك ، فإن لتحلل بروتين الماعز نشاط قوى ضد البكتيريا بدرجة عالية. وتم الاستنتاج أن محللات بروتين شرش اللبن من الأبقار والأغنام والماعز له نشاط مضاد الإشريكية القولونية أكبر من بكتيرياالمكورات العنقودية الذهبية.
من حيث النشاط المضاد للأكسدة, أظهرت أجزاء الأغنام التي يطلقها إنزيم الألكلاز أعلى نشاط مضاد للأكسدة ، مع زيادة ملحوظة في بقاء S. cerevisiae بنسبة 100٪ مقارنة بمجموعة التحكم. لذا فإن بروتين شرش اللبن من الأغنام المتحلل يحتوي على الببتيدات التي يمكن استخدامها لحماية الخلايا حقيقية النواة الحية من الإجهاد التأكسدي ومنع تلف الخلايا.
أظهر التحليل البروتيني عن طريق كروماتوجرافيا سائلة فائقة الأداء / قياس طيف الكتلة الترادفي أن α lactalbumin مسؤول عن النشاط المضاد للأكسدة لبروتين شرش اللبن ، في حين أن اللاكتوفيرين و β lactoglobulin مسئولان بشكل أساسي عن النشاط المضاد للبكتيريا لبروتين شرش اللبن.
أظهر تأثير التحلل المائي لشرش اللبن الماعز الحليب نشاطًا قويًا مضادًا للبكتيريا ضد الإشريكية القولونية والمكورات العنقودية الذهبية فى الحليب المحفوظ عند 4 درجات مئوية ، بدءًا من اليوم الثاني للحقن في حليب مبستر بتركيز 10 مجم مل -1 حتى 168 ساعة من الحقن إما بتركيزات 10 أو 5 أو 2.5 مجم مل -1. لذلك أثبت أن محللات بروتين شرش اللبن الماعز يمكن أن تقتل أو تحد من نمو الميكروبات في الحليب المبستر ، عند التخزين عند 4 درجات مئوية في الثلاجة.
لذلك تسلط الدراسة الحالية الضوء على الإمكانات الكبيرة لتطوير بروتين شرش اللبن كمواد حافظة حيوية آمنة في صناعة منتجات الألبانالعلاج المزدوج ، أو bicalutamide ادى الى عودة مستوى هرمون FSH إلى المستوى الطبيعي كما في المجموعة الضابطة. كذلك كل من العلاج بالسبيرولينا و bicalutamide يرفع مستوى الاستروجين للمستوى الطبيعى مقارنة بمجموعة المريضة. لم تستطع مجموعة سبيرولينا إحداث فرق معنوى في تركيز هرمون التستوستيرون في الدم مقارنة بالمجموعة المريضة. السبيرولينا كان لها القدرة على رفع التعبير الجينى للجين Caspase-3 ، بينما خفض التعبير الجينى للجين TNF-α مقارنةً بالمجموعة غير المعالجة. تحتوي السبيرولينا على العديد من المكونات الاساسية ، لذلك لم يقتصر التأثير على جين Caspase-3 فقط ، بل أيضًا أثر على التعبير الجينى للجين TNF-α في الفئران التى تعانى من سرطان البروستاتا.
العلاج المزدوج بجزيئات الفضة النانوية والسبيرولينا اظهر انخفاضًا معنويًا في متوسط تركيز PSA مقارنة بالمجموعة المريضة ووصل إلى المستوى الطبيعي كالمجموعة الضابطة. اكثر انخفاض معنوى فى مستوى IL6 تحقق مع كل من مجموعة العلاج المزدوج والعلاج بـ bicalutamide مقارنة بالمجموعة المريضةز وصل مستوى FSH إلى المستوى الطبيعي كما في المجموعة الضابطة ولكن مستوى الاستروجين ارتفع بشكل كبير بالمقارنة بجميع المجموعات الأخرى.
أدى الجمع بين AgNPs و Spirulina إلى ارتفاع التعبير الجينى لجينات P53 و BAX و BCL2 مقارنة بالمجموعة المريضة. والجدير بالذكر أن التعبير الجينى لجين BCL2 ارتفع أيضًا ولكن ضمن النطاق الطبيعي كالمجموعة الضابطة. وهذا يوضح التأثير المضاعف لاستخدم كل من جزيئات الفضة النانوية و السبيرولينا على خلايا سرطان البروستاتا. من الواضح ان كل من جزيئات الفضة النانوية و السبيرولينا لا تستطيع رفع التعبير الجينى لجين P53 بمفرده ولكن عند الجمع بينهم يتم ارتفاع التعبير الجينى لهذا الجين المهم فى عملية الموت المبرمج لخلايا السرطان. يرتبط الارتفاع في التعبير الجينى لجين BCL2 نتيجة الجمع بين جزيئات الفضة النانوية و السبيرولينا الذي من المحتمل يرجع الى استعادة التوازن الهرموني داخل أنسجة البروستاتا مما يساعد على التعافي التلقائي. من ذلك نستنتج أن إضافة السبيرولينا إلى جزيئات الفضة النانوية كعلاج مزدوج يعزز تأثيره على جميع المخاطر المصاحبة لسرطان البروستاتا محل الدراسة المذكورة باستثناء عدم التوازن الهرموني الذي يحتاج إلى مزيد من ضبط النسب بين كلا المادتين.
اكدت دراسة انسجة البروستاتا على انخفاض العلامات المرضية بمقدار (75٪) مع مجموعة السبيرولينا ، وبمقدار (50٪) مع مجموعة bicalutamide ، وبمقدار 25٪ مع مجموعة العلاج المزدوج ، واخيراً بمقدار 10٪ فقط لجزيئات الفضة النانوية.
- المجموعة الرابعة (سبيرولينا): تحتوى 12 فأراً تعرضوا لمسببات سرطان البروستاتا وعُولجت
بمستخلص طحالب السبيرولينا بجرعة 4 جم / كجم بالوزن يوميا لمدة 28 يوم متتالية.
- المجموعة الخامسة (علاج مزدوج جزيئات الفضة النانوية وسبيرولينا): تحتوى 12 فأراً تعرضوا
لمسببات سرطان البروستاتا وعُولجت بمركب من جزيئات الفضة النانوية بجرعة 0.3 مجم / كجم بالوزن ومستخلص طحالب السبيرولينا بجرعة 4 جم / كجم بالوزن يوميا لمدة 28 يوم متتالية.
- المجموعة السادسة (مضاد هرمون الذكورة): تحتوى 12 فأراً تعرضوا لمسببات سرطان
البروستاتا وعُولجت بمادة casodex®)) bicalutamide بجرعة 15 جم / كجم بالوزن يوميا لمدة 28 يوم متتالية.
اثبتت نتائج التجربة ان العلاج بـجزيئات الفضة النانوية لم تغير تركيزات كل من total PSA و free PSA مقارنة بالمجموعة المريضة بسرطان البروستاتا وما تزال أعلى بكثير من تلك الموجودة في المجموعة الضابطة. اما مستوى PAP فكان هناك انخفاض طفيف في نشاطه مع كلا المجموعتين, مجموعة جزيئات الفضة النانوية ومجموعة العلاج المزدوج على الرغم من أن الاختلاف لم يكن ذا دلالة إحصائية مقارنة مع المجموعة المريضة. استطاع العلاج بـجزيئات الفضة النانوية عودة مستويات IL6 للمستوى الطبيعى وتغلب على الاضطرابات الهرمونية التي حدثت بالتأثير على طول مسار الغدد بداية من الخصية ثم الغدة النخامية ثم غدة تحت المهاد عن طريق خفض مستوى هرمونى FSH و الاستروجين مع جعل تركيز هرمون التستوستيرون والنسبة المئوية لهرمونى الاستروجين و التستوستيرون مقاربة للمستوى الطبيعى مقارنة بالمجموعة المريضة. التغييرات في الهرمونLH لم تكشف عن فروق ذات دلالة إحصائية بين جميع المجموعات التجريبية. على الرغم من أنها غير ذات دلالة إحصائية ، إلا أن المجموعة المعالجة بـ bicalutamide أظهرت أدنى مستوى لهرمون LH تليها مجموعة العلاج المزدوج. تشير الدراسة (in-vivo) إلى أن العلاج بـجزيئات الفضة النانوية يتسبب فى زيادة معنوية للتعبير الجيني للجين BAX فقط مقارنة بالمجموعة المريضة.
العلاج بالسبيرولينا نتج عنه انخفاض معنوى في مستوى كل من total PSA و free PSA الى المستوى الطبيعى الذى يعد مقارب ايضا للمجموعة المعالجة بـ bicalutamide مقارنة بالمجموعة المريضة, بينما ظل نشاط PAP أعلى بشكل ملحوظ في مجموعتي سبيرولينا و bicalutamide.تجدر الاشارة الى ملاحظة أن كل من مجموعة سبيرولينا و bicalutamide ساهمت في رفع نشاط PAP اعلى من المجموعة المريضة. أدى العلاج بالسبيرولينا وحده إلى خفض مستوى IL6 بشكل ملحوظ مقارنة مع المجموعة المريضة ولكنه لا يزال أعلى من المستوى في المجموعة الضابطة. العلاج بالسبيرولينا ، أو
9- ملخص البحث
يعانى الرجال على مستوى العالم من سرطان البروستاتا الذى يعد من اكثر انواع السرطان مسببا للوفاة. كان هناك العديد من الجهود البحثية فى العصور السابقة للكشف عن ألية تطور الخلايا السرطانية. هناك العديد من الأليات لتفسير نشأة الخلايا السرطانية تتضمن مسار هرمونات الذكورة او المسارات الجينية. البحث عن العوامل المتحكمة فى الخلايا السرطانية يساعد فى تطور التشخيص واستحداث علاجات ناجزة. يوجد مجموعة محدودة من عوامل الخطورة لحدوث سرطان البروستاتا تتمثل فى التقدم فى العمر والتغيرات الجينية والاضطرابات الهرمونية وعوامل البيئة المحيطة ومنها الدهون الغذائية.
تبرز اهمية جزيئات الفضة النانوية لقدرتها المضادة لنمو السرطان بفاعلية اكثر من ايونات الفضة ومن الملفت للنظر فاعليتها مقارنة باحد اشهر مضادات السرطان (Cisplatin) وظهور الخلايا بشكل مقارب للخلايا السليمة مما يدعم استخدام جزيئات الفضة النانوية كمادة مضادة لنمو الخلايا السرطانية.
تنتمى طحالب السبيرولينا الى الطحالب الخيطية الخضراء المزرقة عديد الخلايا وتكتسب خواص مضادة لنمو الخلايا السرطانية طبقا لدراسات سُمية الخلايا.
تهدف الدراسة الحالية الى تقييم التأثيرات الجينية والكيميائية الحيوية لجزيئات الفضة النانوية وطحالب السبيرولينا على سرطان البروستاتا المحدث تجريبيا فى الفئران ويتم ذلك بأجراء القياسات الكيميائية الحيوية وهى total PSA, free PSA, PAP ومن الهرمونات FSH, LH وهرمون التستوستيرون وهرمون الاستروجين ومن بادئ اللالتهاب يتم قياسIL6 وكذلك يتم قياس التعبير الجينى لجينات موت الخلايا المبرمج (P53, Bcl-2, Bax, Caspase-3, TNF-α) بالاضافة الى دراسة خلايا البروستاتا تحت المجهر. لاحداث سرطان البروستاتا تم تجريع جميع الفئران ماعدا المجموعة الضابطة بمادة البيكلوتاميد ثم حقن هرمون التستوستيرون وفى اليوم التالى حقن المادة المسرطنة DMBA ثم اعادة الحقن بالتستوستيرون لمدة ثلاثة اشهر
تم استخدم 72 فأراً معلومة الاوزان فى هذه الدراسة وجرى تقسيمهم الى 6 مجموعات على النحو التالى :
- المجموعة الاولى (الضابطة): تحتوى على 12 فأراً بدون احداث سرطان او اعطاء علاجات لهم.
- المجموعة الثانية (المريضة): تحتوى 12 فأراً تعرضوا لمسببات سرطان البروستاتا وتركت بلا علاجات طوال فترة التجربة.
- المجموعة الثالثة (جزيئات الفضة النانوية): تحتوى 12 فأراً تعرضوا لمسببات سرطان البروستاتا وعُولجت.