الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 151 |  |  |
| | | from | 151 | | |
Abstract
ازدادت في الاوانة الاخيرة عدد الممرضات المقاومة والمضادة للجراثيم والتي ادات الى زيادة المشاكل الصحية على الانسان بشكل مباشر او غير مباشرو ولذلك تهدف الدراسة الحالية الى عزل (الاكتينوميستات ) و التي تتميز بقدرتها على انتاج مركبات نشطة حيويا (المضادات الحيوية) والتي لها تأثير عل مسببات الامراض الفطرية والبكتيرية (سوء كانت للإنسان او الحيوان او النبات )حيث تستخدم في المقاومة الحيوية ضد بعض مسببات الامراض.
وتتلخص خطوات البحث في الاتي :
1) عزل وتنقية الاكتينوميستات.
2) دراسة النشاط التضادي لعزلات الاكتينوميستات ضد الفطريات والبكتريا الممرضة.
3) اختيار افضل بيئة لنمو الاكتينوميستات.
4) اختيار اكفاء عزلات الاكتينوميستات تاثيرا ضد مسببات الامراض النباتية ودراسة النشاط التضادي لها طبيعيا في التربة ومدى تاثر المجتمع الميكروبي بالتربة ودراسة تاثير الاكتينوميستات على مرض موت البادرات في نبات الفاصوليا.
5) ثم اختيار اكفا العزلات من حيث النشاط التضادي ومدى تحمل هذه العزلات للظروف الطبيعية ودراسة تاثير الظروف البيئية على نموها مثل ( درجة الحرارة - pH - مدى تحمل ملح كلوريد الصوديوم)
6) دراسة تاثير مصادر كربونية مختلفة مثل (النشا، الدكسترين، المانتول،مستخلص الذرة الصفراء) على تخليق المضادات الحيوية.
7) دراسة تاثير مصادر نتروجينيه مختلفة مثل ( كبريتات الامونيوم،نترات الصوديوم،اليوريا)على انتاج المضادات الحيوية.
8) استخلاص المضادات الحيوية باستخدام بعض المذيبات مثل(الايثانول،الداى اثيل اثير،خلات الاثيل).ومعرفة افضل مذيب لاستخلاص المضادات الحيوية.
وتتلخص النتائج المتحصل عليها في الاتي:
1) قد تم عزل 12 عزلة من الاكتينوميستات المحلية ودراسة النشاط التضادي لها ضد بعض المسببات المرضية البكتيرية والفطرية ووجد ان لهذه العزلات الاثني عشر القدرة على انتاج مضادات حيوية تثبط الفطريات وبعضها يثبط البكتريا، اولا:نشاطها التضادي ضد الفطريات الممرضة Macrophomina phaseolina ،Fusarium oxysporium, Rhizoctonia solani ووجد ان لهذه العزلات الاثني عشر قدرة تثبيطيه ضد فطر Macrophomina phaseolina ولكن كانت افضل هذه العزلات هي العزلة AC9 بمنطقة رايقة تبلغ(45مم )،بينما كانت لسبعة (7)عزلات قدرة تثبيطيه ضد فطر Rhizoctonia solani ولكن كانت افضل هذه العزلات AC12 بمنطقة رايقة تبلغ(35مم)، بينما لم يكن لهذه العزلات اى تاثير على فطر Fusarium oxysporium. ثانيا: النشاط التضادي لهذه العزلات ضد البكتريا الممرضةStaphylococcus aureus ،Escherisia coli ،Pseudomonas aerogonoisa ووجد ان العزلة AC2 كان لهاتاثير مثبط ضد Staphylococcus aureus ،Escherichia coli منطقة رائقة تبلغ (18و25 ) على التوالي، بينما لم يكن لباقي العزلات اى تاثير ضد هذه البكتريا.
2) كان للعزلات اكبر تاثير مثبط ضد مسببات الامراض الفطرية وخاصة فطر Macrophomina phaseolina ولذلك فقد تم اختيار افضل 7 عزلات من الاثني عشر عزلة اكتينوميستات تاثيرا على هذه الفطر لمكافحته وذلك من خلال اجراء تجربة اصص مزروعة بنباتات الفاصوليا وكانت نتائج هذه التجربة ذات اثر مفيد حيث كان لعزلات الاكتينوميستات القدرة على خفض اعداد فطر Macrophomina phaseolina فى التربة المسبب لمرض موت البادرات وبالتالي عاد ذلك على النباتات بان ازدادت اطوال والاوزان الرطبة والجافة للنباتات وكذلك عدد الاوراق لنباتات الفاصوليا كما انه ادت الى زيادة المجتمع الميكروبي من بكتريا وفطريات وجراثيم اى انها لم يكن للاكتينوميستات تاثير ضار على ميكروبات التربة النافعة.
3) دراسة افضل بيئة لنمو ونشاط الاكتينوميستات على خمسة اوساط بيئة هم بيئة نترات النشا، بيئة الاملاح الغير عضوية والنشا، بيئة الكازين والنشا،بيئة مستخلص الخميرة والشعير، بيئة البيومين البيض. ووجد ان افضل هذه البيئات هي نترات النشا يليها بيئة الاملاح الغير عضوية والنشا.
4) دراسة افضل مدة تحضين لنمو ونشاط الاكتينوميستات حيث تم تلقيح دوارق مخروطية 250 مل تحتوى على 50مل من بيئة مرق نترات النشا وبيئة مرق الاملاح الغير عضوية والنشا ب 2 مل من الاكتينوميستات الملقحة في 9 مل ماء معقم ثم تحضينها على درجة حرارة من 40 - 35 درجة مئوي على هزاز ميكانيكي معدل سرعته 200 لفة في الدقيقة على مدد زمنية مختلفة 2و 4 و6 و8 و10 ايام لمعرفة افضل مدة تحضين تعطى اعلى نشاط للاكتينوميستات وتم قياس درجة العكارة على جهاز الاسبكتروفوتوميتر كل يومين على طول موجى 660 .كانت النتائج كالتالي ان اعلى نشاط لنمو السلالات AC2 ،AC9 كان عند اليوم الرابع من التحضين (4يوم)، بينما اعلى نشاط لنمو السلالةAC12 كان عند اليوم الثامن من التحضين (8).
5) من هنا تم اختيار افضل ثلاثة عزلات من الاكتينوميستات من حيث مدى تاثيرها على مرض تفحم الاوراق على نبات الفاصوليا وتم دراسة تاثير العوامل البيئية عليها مثل :
• دراسة افضل درجة حرارة لنمو ونشاط الاكتينوميستات حيث تم تحضين عزلات الاكتينوميستات الثلاثة على درجات حرارة مختلفة 30 ،35 ، 40 ،45 درجة مئوية فكانت افضل درجة حرارة لنمو ونشاط السلالة AC12 ،AC9 هي درجة حرارة ٤٠ درجة مئوي بينما كانت افضل درجة حرارة للسلالةAC2 هي درجة حرارة 35 درجة مئوي.
• دراسة تاثير درجة الاس الهيدروجيني على نمو الاكتينوميستات حيث تم تدعيم بيئة نترات النشا وبيئة الاملاح الغير عضوية والنشا بدرجات pH مختلفة 6.5 ،6.8 ،7 ،7.2 ،7.4 كانت افضل pH لنمو ونشاط AC12 ،AC9 7.2 بينما افضل pH لنمو ونشاط AC2 7 اى انها محبة للوسط المتعادل المائل قليلا للقلوية.
• دراسة مدى تحمل العزلات الثلاثة لملح كلوريد الصوديوم حيث تم تدعيم بيئة نترات النشا وبيئة الاملاح الغير عضوية بتركيزات مختلفة من ملح كلوريد الصوديوم 2 %، 5%، 7%، 10% فكانت النتائج كالتالي ان للعزلات الثلاثة القدرة على النمو وتحمل كلوريد الصوديوم حتى تركيز 5 % ولكن افضل النمو كان على تركيز 2 %، في حين لم تستطيع العزلات الثلاثة تحمل الملوحة بتركيز اعلى من 5 %..
6) دراسة تاثير مصادر كربونية مختلفة مثل النشا والدكسترين والذرة الصفراء والمانتول بتركيزات مختلفة بالاستبدال مع النشا في بيئة نترات النشا والاملاح الغير عضوية على النشاط التضادي للعزلات المختارة ضد فطر Macrophomina phaseolina واوضحت النتائج ان النشا 20 جرام \لتر يليها الدكسترين 25 جرام لتر يعتبرا من افضل المصادر الكربونية للحصول على اعلى نشاط تضادي للسلالةAC2 والتي اعطت منطقة رائقة تبلغ 34 ،29 مم لكلا المصدرين على التوالي بعد 7-15 يوم من التحضين على درجة حرارة 35 درجة مئوي على هزاز ميكانيكي معدل سرعته 200 لفة في الدقيقة. بينما كانت افضل المصادر الكربونية والتي اعطت اعلى نشاط تضادي بالنسبة للسلالة AC12 النشا 25 جرام\لتريليها المانتول 20 جرام \لتروالتى اعطت منطقة رائقة تبلغ 45 ،31مم لكلا المصدرين ،على التوالي ، بعد 7-15 يوم من التحضين على درجة حرارة 40 درجة مئوي على هزاز ميكانيكي معدل سرعته 200 لفة في الدقيقة. وكانت افضل المصادر الكربونية والتي اعطت اعلى نشاط تضادي للسلالة AC9 النشا ١٠ جرام\لتر يليها المانتول 15 جرام\لتر والتي اعطت منطقة رائقة تبلغ 24،24 مم لكلا المصدرين على التوالي، بعد 7-15 يوم من التحضين على درجة حرارة 40 درجة مئوية على هزاز ميكانيكي معدل سرعته 200 لفة في الدقيقة.
7) كما تم ايضا دراسة تاثير مصادر نتروجينيه مختلفة مثل نترات الصوديوم وكبريتات الامونيوم واليوريا بتركيزات مختلفة (1.5 ، 2 ،2.5 ) جرام \لتر من المصادر النتر وجنية المذكورة سابقا بدلا من نترات البوتاسيوم في بيئة نترات النشا وبيئة الاملاح الغير عضوية والنشا على النشاط التضادي للعزلات الثلاثة ضد فطر Macrophomina phaseolina. حيث اوضحت النتائج ان النشاط التضادي للعزلات المختارة محكوم بنوع المصدر النتروجيني. كانت المصادر النتر وجنية الغير عضوية اكثر ملائمة للنشاط التضادي للعزلات المختارة مقارنة بالمصادر العضوية. فاظهرات النتائج ان نترات الصوديوم تركيز 2 جرا\لتر يليها كبريتات الامونيوم تركيز 2 جرام\لتر كانت افضل المصادر النتر وجنية حيث اعطت اعلى نشاط تضادي للسلالة AC2 ضد الفطر حيث اعطت منطقة رائقة تبلغ 20 ، 20 مم لكلا المصدرين على التوالي، وذلك بعد7-15 يوم من التحضين على درجة حرارة 35 درجة مئوي على هزاز ميكانيكي سرعته 200 لفة في الدقيقة. بينما كانت افضل المصادر النتر وجنية ملائمة للحصول على اعلى نشاط تضادي للسلالة AC12 نترات الصوديوم تركيز 1.5 يليها كبريتات الامونيوم تركيز 2.5 جرام\لتر والتي اعطت هالة رائقة تبلغ 27 ،22 مم لكلا المصدرين على التوالي ،وذلك بعد7-15 يوم من التحضين على درجة حرارة 40 درجة مئوي على هزاز ميكانيكي سرعته 200 لفة في الدقيقة. ولكن كانت افضل المصادر النتر وجنية ملائمة للحصول على اعلى نشاط تضادي للسلالة AC9 نترات الصوديوم تركيز 1.5 يليها نترات تركيز الصوديوم 2.5 يليها اليوريا تركيز2.5 جرام\لتر والتي اعطت هالة رائقة تبلغ32 ،35 ، 38 مم على التوالي ،وذلك بعد7-15يوم من التحضين على درجة حرارة 40 درجة مئوي على هزاز ميكانيكي سرعته 200 لفة في الدقيقة. وبناء على النتائج السابقة فان النشا كان افضل المصادر الكربونية كما ان نترات الصوديوم كانت افضل المصادر النتر وجنية ملائمة للحصول على اعلى نشاط تضادي للعزلات الثلاثة المختارة ضد فطر Macrophomina phaseolinaولذلك تم دراستهم. حيث اشارت النتائج الى ان استخدام النشا 20 جرام\لتر ونترات صوديوم 2 جرام\لتر قد اعطت اعلى نشاط تضادي للسلالة AC2 ضد فطر Macrophomina phaseolinaوالتي اعطت هالة رائقة تبلغ (20 ، 34 مم) ،بينما استخدام النشا 52 جرام\لتر ونترات صوديوم 1.5 جرام\لتر قد اعطت اعلى نشاط تضادي للسلالة AC12 ضد فطرphaseolina Macrophominaوالتي اعطت هالة رائقة تبلغ (20 ، 45 مم) ،استخدام النشا 10 جرام\لتر ونترات صوديوم 1.5 جرام\لتر قد اعطت اعلى نشاط تضادي للسلالة AC9 ضد فطر Macrophomina phaseolinaوالتي اعطت هالة رائقة تبلغ (20 ، 24 مم) .وذلك بعد 7-15 يوم من التحضين على درجة حرارة تتراوح من 40 - 35 درجة مئوية على هزاز ميكانيكي معدل سرعته200 لفة في الدقيقة.
8) استخلاص المضادات الحيوية باستخدام المذيبات مثل الايثانول ، الداى اثيل اثير ، خلات الاثيل:
قد تم استخلاص المضاد الحيوي من راشح مزارع الثلاثة عزلات اكتينوميستات باستخدام بعض المذيبات حيث تم ذلك بتنمية الاكتينوميستات في بيئة مرق نترات النشا وبيئة الاملاح الغير عضوية والنشا ثم تحضينها في الحضان على درجة الحرارة المناسبة لكل سلالة والتي تتراوح من 40 - 35 درجة مئوي لمدة 15 يوم ثم بعد ذلك تم اجراء طرد مركزي للعزلات الثلاثة على 5000 لفة لمدة 20 دقيقة ثم بعد ذلك اخذ الراشح وتم وضع 10 : 1 حجم\حجم من الراشح الى المذيب وذلك من كل المذيبات الاتية (الايثانول ، الداى اثيل اثير ، خلات الاثيل ) وذلك كل منهم على حده ثم يترك في الهواء حتى تتبخر المذيبات ويتبقى المضاد الحيوي ثم استخدمت بعد ذلك هذه المواد المستخلصة بالمذيبات المختلفة في قياس نشاطها التضادي ضد كل من فطر Macrophomina phaseolina وبكتريا Staphylococcus aureus ، E .coli لمعرف افضل مذيب في استخلاص المضاد الحيوي. وكانت النتائج كالتالي ان افضل مذيب هو الايثانول حيث اعطى مع الثلاثة سلالات (AC2 ،AC9 ،AC12 )اعلى نشاط تضادي ضد فطرMacrophomina phaseolina حيث اعط مناطق رائقة تبلغ (40 ،40 ،20 مم)على التوالي.
9) اخيرا تم تعريف المركبات الموجودة في الراشح باستخدام جهاز HPLC Mass واتضح ان يوجد بها ١٠ مركبات مضادة للميكروبات.