الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 169 |  |  |
| | | from | 169 | | |
Abstract
أعضاء المكورات العنقودية واسعة الانتشار في الطبيعة، حيث تم عزلها من مصادر بيئية واسعة مثل الهواء والمياه والتربة، والنباتات، واللحوم والدواجن ومنتجات اللحوم.
عمليات المسح والكشف عن المكورات العنقودية ولاسيما المكورات العنقودية الذهبية الممرضة في مصادر المياه والمنتجات الغذائية، والعدوى السريرية في الإنسان مهمة جدا وذلك لاسباب وبائية.
خلال عام 2012 – 2013 تم جمع 150 عينة تتكون من 50 عينة غذائية (حليب خام وجبن خام) من الأسواق المحلية، و50 عينة مرضية (بول، ومسحات من التهاب الجروح)، و50 عينة مياه (مياه ، مياه صرف صحى) داخل نطاق مدينة مسلاته بليبيا.
تم عزل 52 عزلة بكتيرية من المكورات العنقودية، وتحت الاختبارات الكيموحيوية والمصلية التعريفية تبين ان عدد 17 عزلة بكتيرية موحبة لإختبار التخثر Coagulase test بنسبة (32.69%) كانت مكورات عنقودية ذهنية S. aureus ، في حين كانت 35 عزلة بكتيرية عنقودية سالبة لاختبار التخثر بنسبة(67.30%) متمثلة في 19 عزلة S. epidermidis، و16 عزلة S. chromogenes .
المكورات العنقودية الذهبية S. aureus توصف بأنها بكتيريا متغيرة فى العديد من الصفات المورفولوجية، وكذلك ظهور المقاومة للمضادات الحيوية فى السلالات المكورات العنقودية الذهبية التي هي مشكلة خطيرة في العديد من المستشفيات فى، حيث تسبب في مشاكل للعديد من المستشفيات كما أكدت الكثير من الدراسات.
في محاولة لوضع استراتيجيات فعالة للسيطرة على الكائنات الحية المتغيرة وراثياوظاهريا، فمن الضروري توصيف و بدقة مدى التنوع الجيني والخصانص الظاهرية الموجودة في الكائن الممرض.
أختبرت 17 عزلة من بكتيريا S. aureus لدراسة مدى انتشار بكتيريا العنقودية الذهبية المقاومة للمضاد الحيوي الميثاسلين Methicillin(MRAS)، حيث أثبتت النتائج أن معدل انتشارMRSA كانت (23.52%)، في حين S. aureus المتأرجحة (23.52%)، بينما كانت S. aureus الحساسة MSSAبمعدل (52.94%).
تم اختيار ثلاث عزلات من المكوراث العنقودية S. aureus من كل المصادر بناء على مقاومتها للمضاد الحيوي الميثاسلين، حيث اختيرت العزلة11SaUTI من العينات المرضية و العزلة 5SaRM كممثل لمصدر الغداء المقاومتين للمضاد الحيوي الميثاسلين، في حين كانت 21SaWW من مصدر الماء والتي كانت متأرجحة بالنسبة لحاسيتها للمضاد الحيوي الميثاسلين.
من الدراسات الظاهرية Phenotype التى أجريت خلال هذه الدراسة إختبرت العزلات الثلاث 11SaUTIو5SaRM و21SaWW لمدى تأثير بعض المضادات الحيوية، أثبتت النتائج أن العزلة 21SaWW مقاومة للمضاد الحيويPenicillin وAmpicillin، Cefotaxime و Tobramycin، Erythromycin، في حين كانت حساسة للمضاد الحيوى Cefodizime وCefazolin وRifamycin و Cefodizime و Cefazolinو Rifamycin في حين أظهرت النتائج أن 5SaRM مقاومة للمضادات الحيوية Penicillin وAmpicillin، وKanamycin، في حين كانت حساسة Cefodizime و.Vancomycin
بينما كانت العزلة 11SaUTI أظهرت مقاومة المضادات الحيوية Penicillin و Ampicillin، Erythromycin و Tobramycin ، فى حين كانت حساسة للمضادات الحيوية VancomycinوRifamycin .
أثبتت النتائج ايضا أن العزلات الثلاث المختبره قدرتها إنتاج الغشاء الحيوى Biofilm باستخدام تقنية الزراعة في الأطباق الدقيقة، حيث أثبتت النتائج إنتاج الغزلات الثلاث للغشاء الرقيق Biofilm ، ولكن كانت بتركيز متباينة حيث وجدت بتركيز متوسط 0.47 فى العزلة 11SaUTI، وعالية فى العزلة 5SaRM بنسبة 1.5، بينما كانت ايضا بتركيز عالي كذلك1.1 في 21SaWW عند طول موجي 750nm O.D ، وهذا يبين أن العامل البيئى له دور في قدرة البكتيريا على إنتاج الغشاء الحيوي Biofilm والمهم في مقاومة المضادات الحيوية بالنسبة لمكورات العنقودية الذهبيةS. aureus .
باستخدام تقنية SET-RPLA أختبرت العزلات الثلاثه على إنتاج السموم المعوية Enterotoxins ، حيث لوحظ إنتشار السم المعوي النمط B بين العزلات الثلاث على الرغم من وجود تباين في قدرة إنتاجه تحت تطبيق ظروف مثل pH والحرارة بين العزلات الثلاث، بينما كانت قدرة إنتاج السم المعدي النمط Aملحوظ في 5SaRM و21Saww في حين لم يكشف في 11SaUTI، وهذا يدل على العامل البيئي مهم ذو تأثير على إنتاج هذا النمط من السموم.
أوضحت النتائج وجود فاجات متخصصة لكلاً من 11SaUTI و5SaRM و21SaWW من العينات المجمعة من فرع الرشيد ومصبات المصارف وذلك عند استخدام اختبار البقعة في الكشف عن تواجد الفاحات.
فحصت جزئيات الفاجات المعزولة بالميكروسكوب الإلكتروني لتحديد الأشكال المورفولوجية للفاجات وأوضح الفحص تنوع أشكالها حيث كانت ذو رأس أيزومترية وذيل طويل منضغط وأخرى ذات ذيل قصير، حيث تعددت أبعادها بين فاجات العزلات الثلاث.
تم دراسة التتابع الجيني للثلاث عزلات باستخدام الكشف عن جين16s rDNA اعتماداً على البادئ المتخصص باستخدام تقنية PCR، حيث أظهرت النتائج تباين أولاً في كثافة الحمض النووي بين الثلاث عزلات عند التفريد على الهلام الكهربائي.وأوضحت التحليلات الجزيئية اعتماداً على مقارنة التباين النيوكليوتيدي وشجرة القرابة للثلاث عزلات البكتيرية، حيث كان التقارب بين S5aRM و11SaUTI بنسبة 99% في حين كان 21Saww مع الاثنين 98%.
تم تسجيل العزلات البكتيرية الثلاثة فى بنك الجينات تحت ارقامLC121093.1 للعزله ( (11SaUTI و LC121095.1 للعزلة ((21SaWW و LC121094.1 للعزلة (5SaRM).
أوضحت النتائج أن هناك اختلاف فى التركيب الثانوى للجين 16s rDNA بين العزلات الثلاث باستخدام برنامج . DNAMAN
باستخدام تقنية التفاعل البلمرة التسلسلى PCR تم الكشف عن الجين icaA المسؤول على انتاج الغشاء الحيوى Biofilm فى الثلاث عزلات المختبرة ، حيث لوحظ وجود الجين icaA فى كل العزلات 11SaUTI, 5SaRM and 21SaRWوحجم قطعة الجين كانت 250bp، واظهت النتائج كذلك تباين فى كثافة الجين بين العزلات الثلاث عزلات .
وقد توصلنا الى:
1- ان العامل البيئى يلعب دور هام فى الاختلافات الظاهرية لبكتيريا S.aureus بالرغم ان لايمكن ملاحظتها بالاختبارات الروتينية المعملية.
2- وجود إختلاف وراثى جزيئى ضمن النوع الواحد وهذا قد يعزى ايضا للظروف البيئة التى تستوطن بها S.aureus.